ARTÍCULO ORIGINAL / ARTIGO ORIGINAL

Serotipos y antibiotipos de Plesiomonas
shigelloides circulantes en Cuba

Serotypes and antibiotypes of Plesiomonas shigelloides in Cuba
Laura Bravo1
Margarita Ramírez1
Lic. Roberto Cabrera1
Luis Enrique Cabrera1
Arley Rodriguez1
Raquel I. Hernández2
Tec Nelsideismy Castañeda1
Tec Anabel Fernández1

1 Laboratorio de Referencia
Nacional de Enfermedades Diarreicas Agudas. Instituto de Medicina Tropical Pedro Kouri. Cuba.
2 Centro Provincial de Higiene y Epidemiología. Camagüey.


Rev Panam Infectol 2004;6(2):23-27.


Recibido en 6/5/2004.
Aceptado para publicación en 4/6/2004.


 Resumen

Plesiomonas shigelloides es un bacilo Gram-negativo, anaerobio facultativo, oxidasa positivo, el cual comprende un extenso grupo serológico, se encuentra en diversos ecosistemas, lo que le confiere una distribución cosmopolita. Se investigó la susceptibilidad frente a 18 drogas antimicrobianas y la estructura antigénica en 89 cepas de Plesiomonas shigelloides, aisladas de pacientes con Enfermedad Diarreica Aguda (EDA) procedentes de diferentes centros de salud de Cuba. La caracterización fenotípica y antigénica se realizó según técnicas convencionales. La susceptibilidad antimicrobiana fue estudiada por el método de Kirby-Bauer. Las 89 cepas estudiadas mostraron resistencia a la ampicillina y el 87.6% resultó resistente a la estreptomicina. Todos los aislamientos fueron sensibles a la netilmicina, cloranfenicol, cefotaxima, ciprofloxacina, gentamicina, ofloxacina y trimetoprim-sulfametoxazol. Se demostró por primera vez en nuestro país la circulación de los serotipos: O84: H48, O39: H3, 034:H34, O53: H3, O67: H3, O89: H8, O20: H2, O56: H18, O71: H31 y O81: H22.
Palavras clave: Plesiomonas shigelloides, Serotipificación, Susceptibilidad Antimicrobiana.

Abstract

Plesiomonas shigelloides are Gram-negative, motile, non-spore-forming bacilli, which are facultatively anaerobic and oxidase positive. These bacilli include an extensive serological group and are commonly found in different ecosystems, conferring them a cosmopolitan distribution. Antimicrobial susceptibility of 89 Plesiomonas shigelloides strains to 18 antibiotics were tested by Kirby-Bauer method; these strains were taken from patients suffering acute diarrhoeal disease from different Cuban health care centers. The antigenic and phenotypic characterization of the strains studied was made by conventional method. All strains showed resistance to ampicillin and 87.6% turned out to be resistant to streptomycin. All the isolates were susceptible to netilmicin, chloramphenicol, cefotaxime, ciprofloxacin, gentamicin, ofloxacin and trimetoprim-sulfametoxazole. This is the first report in our country on the circulation of the O84: H48, O39: H3, 034: H34, O53: H3, O67: H3, O89: H8, O20: H2, O56: H18, O71: H31 y O81: H22 serotypes.
Key words: serotyping, Antimicrobial susceptibility, Plesiomonas shigelloides.

Introducción

En la etiología bacteriana de las enfermedades diarreicas agudas (EDA) se señalan agentes clásicos como los pertenecientes a los géneros Salmonella, Shigella, Escherichia, Vibrio, y los patógenos emergentes Campylobacter, Aeromonas y Plesiomonas(1).

Plesiomonas shigelloides se ha ubicado recientemente dentro de la familia Enterobacteriaceae(2). Ha sido asociada con casos de infecciones intestinales y extraintestinales, siendo estas últimas menos frecuentes. Dicho microorganismo ha sido implicado en varios brotes y casos esporádicos de diarreas en hospederos inmunocompetentes. La septicemia causada por este agente ha sido reportada predominantemente en pacientes inmunocomprometidos(3).

Plesiomonas shigelloides puede ser aislada en las heces de animales tanto de sangre fría como de sangre caliente, estos incluyen gatos, perros, cerdos, buitres, vacas, serpientes, tritones, peces y mariscos. Ha sido aislada a partir de aguas dulces, estanques y agua salada. Las infecciones en humanos están asociadas con el consumo de alimentos contaminados, especialmente ostras y mariscos, agua o por contacto directo con animales colonizados(4). Este microorganismo constituye un grupo serológico extenso compuesto por 102 antígenos somáticos (AgO) y 51 antígenos flagelares (AgH), que se encuentran ampliamente distribuidos en el mundo, y por su hábitat cosmopolita se puede ubicar en diversas regiones geográficas(5).

El diagnóstico serológico de Plesiomonas shigelloides contribuye en gran medida, desde el punto de vista epidemiológico al establecimiento de un sistema de vigilancia para determinar la relación entre cepas dentro de una misma genoespecie(6). A pesar de que la enfermedad diarreica causada por Plesiomonas shigelloides es autolimitada, la terapia antimicrobiana ha sido utilizada con eficacia en pacientes con diarrea por más de 4 ó 5 días, en individuos inmunodeprimidos con enfermedades subyacentes o en infecciones extraintestinales(7). Debido a ello y dado el escaso número de trabajos publicados en América Latina y el Caribe, nos hemos propuesto investigar los serotipos circulantes en Cuba, así como conocer la susceptibilidad a varias drogas antimicrobianas.

Materiales y métodos

Durante los años 2000-2001 se recibieron en el Laboratorio Nacional de Referencia de (E.D.A.), del Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kourí”, un total de 89 cepas de Plesiomonas shigelloides, aisladas a partir de heces de pacientes con (EDA), 5 de ellas procedentes de un brote de enfermedad de transmisión digestiva en la provincia de Camaguey, el resto procedian de 11 de los 14 Centros Provinciales de Higiene y Epidemiología del país.

Todas las cepas fueron ubicadas en género y especie de acuerdo con lo que se refiere en la literatura especializada(8). La determinación de los serotipos se realizó según el esquema de serotipaje internacional de Aldová y colaboradores(5). Se utilizaron suspensiones de cultivo de 18-24 horas, las cuales fueron aglutinadas en láminas que contenian antisueros somáticos y flagelares diluidos 1:10 y 1:25, respectivamente, procedentes del Instituto Nacional de Higiene y Epidemiología de Praga. En algunas cepas la aglutinación flagelar pudo ser determinada después de realizar algunos subcultivos en medio de agar nutriente semisólido, para estimular la producción de flagelos.

La susceptibilidad antimicrobiana frente a 18 drogas: ampicilina (AMP), amikacina (AMK), cloranfenicol (C), netilmicina (NET), doxiciclina (DO), ácido nalidíxico (NA), aztreonam (ATM), kanamicina (K), ceftazidima (CAZ), estreptomicina (S), cefotaxima (CTX), mezlocilina (MEZ), imipenem (IPM), ampicillin/ácido clavulamico (AMC), ciprofloxacina (CIP), cefalexina (CN), ofloxacina (OFX) y trimetroprim/ sulfametoxazol (SXT), se realizo por el método de difusión en disco en agar (Kirby-Bauer), según las normas recomendadas por el Comité Nacional de Estándares de Laboratorio Clínico (NCCLS)(9). Se utilizaron como cepas controles, Plesiomonas shigelloides CNCTC 5132, Staphylococcus aureus ATCC25923, Escherichia coli ATCC 25922 y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27850.

Resultados

Las 89 cepas en estudio resultaron ser bacilos Gram-negativos, anaerobios facultativos, todas poseian codificación genética para las enzimas citocromo oxidasa, lisina y ornitina decarboxilasa asi como para la arginina dihidrolasa, utilizaron el inositol, pero no el manitol. Se observaron reacciones negativas para citrato, urea, triptofano deaminasa y tiosulfato reductasa. No fue producido ácido a partir del sorbitol ni de la rannosa, por lo cual quedaron ubicadas en el género Plesiomonas y especie shigelloides.

Los resultados en por cientos del estudio de la susceptibilidad antimicrobiana realizado a las cepas en estudio, se muestran en la tabla 1, así como su interpretación en términos de resistencia (R), intermedio (I), y sensible (S). El 100% de las cepas se comportó sensible frente a las siguientes drogas: cloranfenicol, netilmicina, cefotaxima, ciprofloxacina, cefalexina, ofloxacina y trimetoprim-sulfametoxazol. Para la ceftazidima la sensibilidad fue del 97.8%. Analizando el comportamiento de las cepas resistentes podemos plantear que el 100% lo fueron al ampicilina, y el 87.6% a la estreptomicina. Las 5 cepas pertenecientes al brote mostraron el mismo patrón de resistencia AMP (R), S (R), K (R).





De las 89 cepas de Plesiomonas shigelloides estudiadas, 78 se clasificaron antigénicamente, 7 resultaron ser rugosas (debido a que aglutinaron frente a solución salina al 0,9%) y 4 no aglutinaron frente a ningún antisuero.

De las 78 cepas serotipadas, se identificaron 31 serotipos diferentes, circulando 10 de ellos por primera vez un nuestro país los cuales se distribuyeron entre las siguientes provincias: Granma (O20: H2), Santiago de Cuba (O56:H18)(O84:H48)(O67:H3), Camagüey (O71:H31)(O81:H22)(O84:H48), Holguín (O84:H48) (O53:H3), Las Tunas(O34:H34)(O89:H8), Pinar del Río (O84:H48) y Ciudad de la Habana(O39:H3).

Las provincias donde se encontró mayor diversidad de serotipos fueron: Camagüey con 11 (O22:H3, O32:H14, O71:H31, O81:H3, O84:H48, O94:H3, O38:H8, O68:H2, O35:H11, O95:H11 y O9:H2), Santiago de Cuba con 10 (O8:H3, O23:H1a1c, O56:H18, O94:H3,O38:H8, O84:H48, O2:H1a1c, O67:H3, O35:H11, O96:NM, Las Tunas con 8 (O22:H3, O55:H46, O94:H3, O74:H5, O89:H8, O7:H40, O34:H34, O68:H2), Holguín 7 (O9:H2, O26:H1a1c, O84:H48, O94:H3, O35:H11, O38:H8, O53:H3. Las 5 cepas procedentes del brote de enfermedad de transmisión digestiva en la provincia de Camagüey pertenecieron al serotipo O94:H3. Tabla 2.





Discusión

Las infecciones gastrointestinales causadas por Plesiomonas shigelloides son por lo general autolimitadas, pero pueden presentarse casos severos con abundantes diarreas acuosas y deshidratación(10).

La principal evidencia de que Plesiomonas shigelloides es un patógeno entérico para las persona inmunocompetentes es que en los estudios hechos hasta la fecha, éste microorganismo ha sido cultivado de las heces de pacientes con diarreas con mayor frecuencia que de las heces de personas sin diarreas(11).

Abbott y colaboradores en el año 1991, en un estudio realizado en 16 cepas de Plesiomonas shigelloides, demostraron que no existen relación entre el sitio de aislamiento, características fenotípicas y serológicas con la patogenicidad, además de este, no existen otros estudios publicados donde quede demostrada la relación entre los serotipos y la patogenicidad de este microorganismo(12).

Plesiomonas shigelloides puede estar asociada con otros enteropatógenos (Shigella, Salmonella y Escherichia coli), no podemos analizar esta asociación en este estudio porque el mismo se realizo en el Laboratorio Nacional de Referencia de (E.D.A.), al cual las cepas Plesiomonas shigelloides fueron remitidas posterior al diagnóstico microbiológico del coprocultivo y no existio ningún informe donde se constatara relación con estos microorganismos.

En Cuba en los laboratorios de microbiología clínica, el aislamiento y la identificación de Plesiomonas shigelloides se realiza según las normas y procedimientos establecidos en el diagnóstico microbiológico utlizado internacionalmente(13).

El uso de antimicrobianos puede reducir el volumen y duración de las diarreas y acortar el período de duración de excreción del patógeno al ambiente(10). De igual manera ocurre en los casos de septicemia y especialmente en pacientes inmunodeprimidos donde el tratamiento con antimicrobianos es de vital importancia(3).

Desde la década del 60 hasta la fecha se han realizado diversos estudios con vista a determinar la susceptibilidad de este microorganismo a diversas drogas; demostrandose que este ha permanecido susceptible a las drogas más comúnmente usadas en el tratamiento de las enfermedades diarreicas: cloranfenicol, tetraciclinas, trimetoprim-sulfametoxazol; pero observadose resistencia a las penicilinas(14).

Nuestros resultados son similares a los publicados por de Mondino y colaboradores en 1995, quienes reportaron valores de susceptibilidad de 100% para la ciprofloxacina y trimetoprim-sulfametoxazol(15). Bravo y colaboradores en el 1998 reportaron una total susceptibidad frente al cloranfenicol, trimetoprim-sulfametoxazol y cefotaxima, resultados estos similares a los encontrados en el presente estudio(16).

El elevado porcentaje de susceptibilidad en nuestra investigación frente al ácido nalidíxico, doxiciclina, aztreonam e imipenem se relacionan con los señalados por Visitsunthorn y colaboradores en el año 1995(17) y con Marshall y colaboradores en el año 1996(18). Según la literatura especializada, para la estreptomicina se reporta muy baja efectividad, lo que está acorde con nuestros resultados y con los publicados por Avison y colaboradores en el aòo 2000(19).

Los patrones de resistencia descritos para P. shigelloides frente a antibióticos de naturaleza b-lactámicos indican una elevada resistencia a la ampicilina y algunas cefalosporinas, dentro de las que se incluyen cefoperazona y cefepima, de ahí que estas drogas de amplio espectro no deben ser utilizadas en infecciones extraintestinales sin previa realización de la prueba de sensibilidad antimicrobiana frente al microorganismo aislado(20).

En el presente estudio se evaluó la susceptibilidad a la ampicilina por solo haber sido evaluada la misma con anterioridad en un número muy pequeño de cepas. Los resultados obtenidos están acorde con lo publicado a nivel internacional(21).

Avison y colaboradores en el 2000(19), demostraron que la totalidad de las cepas que habían sido enfrentadas a drogas de naturaleza b-lactámica resultaron ser resistentes. En el caso de la mezlocilina nuestros resultados son similares a los descritos por Stock y colaboradores en el año 2001(21), quienes demostraron una marcada resistencia a esta droga.

Las cepas pertenecientes al brote mostraron el mismo patrón de resistencia AMP (R), S (R), K (R). Un comportamiento semejante fue encontrado en nuestro país en el año 1998 en cepas aisladas de un brote de intoxicación alimentaria en la provincia de Santiago de Cuba(22).

El patrón de resistencia de las 89 cepas en estudio fue: AMP (R), K (R), S (R), MEZ (R). Patrones similares han sido reportados por Stock y colaboradores en el año 2000(21).

Con una sola especie y múltiples serotipos se conoce que Plesiomonas shigelloides presenta reacción cruzada con algunos serotipos del género Shigella, por ejemplo el serotipo O23: H1a1c presenta reacción cruzada con Shigella boydii(5).

Se ha descrito que en algunos serotipos han sido reportados en diferentes ecosistemas, así como otros son privativos de determinadas áreas geográficas, de ahí que los estudios de serotipaje resulten útiles para fines epidemiológicos o para determinar las relaciones entre una misma genoespecie(23).

El serotipo O94:H3 con un 14,6% resultó ser el que con mayor frecuencia se aisló en el periodo estudiado, el serotipo O23: H1a1c fue identificado en la provincia de Matanzas en el año 1998, el mismo es nuevamente identificado en el año 2001, pero en esta ocasión en la provincia de Santiago de Cuba, lo que demuestra el carácter cosmopolita de este microorganismo. Estos resultados son similares a los publicados por Krovaceck y colaboradores, quienes han demostrado la circulación de Plesiomonas shigelloides en diferentes áreas geográficas independiente de las características ecológicas del ambiente(24). (Ver tabla 2), esto discrepa con los resultados publicados en Cuba con anterioridad donde se señalaba al serotipo OI7: H11 con el mayor porciento de circulación(6).

Los resultados de esta investigación pudieran contribuir a los múltiples esfuerzos que desde el punto de vista epidemiológico se realizan a nivel internacional para determinar las relaciones epidemiológicas de esta bacteria, sin embargo serian necesarios estudios moleculares como por ejemplo la electroforesis en gel de campo pulsado entre otras, para determinar las relaciones clínico epidemiológicas entre estas cepas.

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Correspondencia:
Dra. Laura Bravo
Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí
Km 6, Autopista Nivia del Mediodía. Ciudad de La Habana, Cuba.
e-mail: laura@ipk.sld.cu